Protocolo de extracción de DNA a partir de cola de ratón

1. Calcular el número de epp y preparar una mix de 490uL de lysis buffer +10uL de Proteinase K por eppendorf. Añadir 500uL de la mix a cada epp que contiene entre 0.5-1cm de cola de ratón.

2. Incubar o/n a 55ºC  agitando a ser posible.

3. Centrifugar 15’ a 13,200rpm

4. En un nuevo set de eppendorfs añadir 500uL de isopropanol por epp.Transferir el sobrenadante de la centrifugació anterior a cada eppendorf nuevo.

5. Por inversió vortear bien los epp hasta ver  “medusa DNA”

6. Centrifugar 3’ a 13,200 rpm

7. Decantar el sobrenedante.

8. Añadir 500uL EtOH 70% al precipitado.

9. Vortear los epp. para limpiar el precipitado.

10. Centrifugar 2’ 13,200rpm

11.Quitar el maximo de sobrenandate posible sin llevarnos el precipitado.

12.Dejar evaporar a temperatura ambiente los restos de etanol  o  60ºC . Tarda unos(10’) hasta ver el precipitado seco.

13.Resuspender en 300uL TE

14. Guardar a 4ºC.

Lysis buffer per 500ml:

50ml de 1M Tris/HCl pH 8.5-9

20ml 5M NaCl

10ml 10% SDS

5ml 0.5M EDTA

415ml H2O MQ

El lysis buffer se guarda a temperatura ambiente. 

L’SDS  4ºC precipita.